隨著基因組研究的不斷推進,單分子實時測序系統(tǒng)以PacBio測序為代表的第三代基因測序技術逐漸應用到多個科研領域。該平臺利于單分子實時測序技術,又稱作SMRT測序,基于納米小孔的單分子讀取技術,無需擴增即可快速完成序列讀取。PacBio Sequel測序儀是美國太平洋生物技術公司基于PacBio RSII平臺的基礎上,新推出的第三代測序平臺,該系統(tǒng)以測序通量高、單Gb數據成本低、周期短而突出于RSII平臺。

§ 單分子實時測序系統(tǒng)SMRT技術原理:
單分子實時測序建立在兩項關鍵的技術創(chuàng)新之上,克服了測序領域的重大挑戰(zhàn)。
1、零模波導孔技術只允許激光照亮反應孔底部,也就是DNA聚合酶和模板復合物固定的位置。
2、熒光基團標記在核苷酸的三磷酸末端,不僅可以模擬天然DNA鏈合成過程,而且可以實時記錄復合物上堿基摻入的順序。
§ 單分子實時測序系統(tǒng)特點:
單分子實時測序技術可以提供長讀長序列和均一覆蓋度的數據,完成迄今為止更為全面的基因組從頭組裝。真正的全基因組測序應該為基因組中所有類型的變異提供完整且準確的信息,包括結構變異、可移動元件、單體型、低復雜度區(qū)域以及表現(xiàn)遺傳學修飾。
? 超越基因組草圖,產生Mb大小的contigs和完整基因組拼接;
? 獲得SNPs及其他基因組變異;
? 呈現(xiàn)基于擴增的測序技術無法獲得的基因組區(qū)域;
? 包含啟動子區(qū)的完整基因模型注釋;
? 獲得二倍體基因組的單體型信息;
? 捕獲表現(xiàn)遺傳學信息。